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實(shí)驗(yàn)室凈化工程
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PCR實(shí)驗(yàn)室

pcr實(shí)驗(yàn)室也叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室,pcr實(shí)驗(yàn)室有效避免在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中造成試劑、標(biāo)本、擴(kuò)增物以及操作人員的交叉污染,保證人員安全及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠。

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詳情介紹

       pcr實(shí)驗(yàn)室布局

  要完成一組pcr實(shí)驗(yàn),通常需要經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析4個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程。這4個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)用房應(yīng)相鄰布置,組成一個(gè)獨(dú)立的pcr實(shí)驗(yàn)區(qū)。標(biāo)準(zhǔn)的pcr實(shí)驗(yàn)區(qū)包括:試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。

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       試劑準(zhǔn)備區(qū)

  該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。

  試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

  試劑準(zhǔn)備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,計(jì)算冷負(fù)荷時(shí),需要將它們計(jì)算在內(nèi)。

  房間的面積宜控制在15m2~20m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)正壓狀態(tài),以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,造成污染。

  標(biāo)本制備區(qū)

  該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。

  標(biāo)本制備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,計(jì)算冷負(fù)荷時(shí),需要將它們計(jì)算在內(nèi)。在標(biāo)本制備區(qū),還需要配備生物安全柜,用于進(jìn)行提取核酸的操作。

  為避免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán),造成標(biāo)本之間的交叉污染,出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來(lái)自實(shí)驗(yàn)室,排風(fēng)經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾后直接排至室外,不允許回到安全柜和實(shí)驗(yàn)室中。

  根據(jù)經(jīng)驗(yàn),如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備生物安全柜,每配備一臺(tái),實(shí)驗(yàn)室的面積增加10m2;標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25m2~30m2之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

  擴(kuò)增室

  該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn) 行。

  在巢式PCR測(cè)定中,通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開反應(yīng)管,因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性,第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

  擴(kuò)增室主要配備PCR實(shí)驗(yàn)室的核心儀器PCR儀,本文實(shí)例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

  在實(shí)驗(yàn)室建造過(guò)程中,需要給PCR儀配備專門的UPS電源,以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15~20

  本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。建議采用  5~10Pa壓差,在控制上比較容易實(shí)現(xiàn)。

  產(chǎn)物分析區(qū)

  該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。

  在室內(nèi)配備通風(fēng)櫥,保證房間內(nèi)的相對(duì)負(fù)壓,空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)面積控制在15㎡~20

  本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。建議采用5~10Pa壓差,在控制上比較容易實(shí)現(xiàn)。

  正負(fù)壓區(qū)域緩沖室的設(shè)置

  根據(jù)壓力梯度的要求,試劑配制室和樣品處理室為相對(duì)正壓,擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室為相對(duì)負(fù)壓,要求正壓的區(qū)域和要求負(fù)壓的區(qū)域的緩沖室內(nèi)的壓力設(shè)計(jì)大不相同。